原位雜交第二天
1.
1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)。
2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,湖北原位雜交,放置30分鐘,重復一次。
3)置換2XSSCT1ml,60℃,放置15分鐘。
4)置換0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分鐘,重復一次。
2.
1)用MABT洗兩次,每次五分鐘,原位雜交檢測,放在搖床輕輕搖動。
2)室溫下加1ml 1:2:7溶液,時間為一小時。
3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶連,4C 冰箱過夜。
在研究DNA分子原理的基礎上發(fā)展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能過氫鍵結合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點,染色體熒光原位雜交,應用帶有標記的(有性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、等非性物質)DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA)片段進行雜交,然后可用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位原位雜交是一種非常重要的技術,因為它可以在細胞或組織的自然環(huán)境中研究基因表達和調控。它可以幫助科學家們了解基因在特定組織或細胞類型中的作用和功能,以及在疾病發(fā)生和發(fā)展過程中的變化。此外,這項技術還可以用于檢測基因變異和染色體異常,以及監(jiān)測細胞生長和凋亡。
雖然原位雜交是一項非常有用的技術,但它也有一些限制。首先,染色體原位雜交,探針的特異性可能受到干擾,導致錯誤的結果。其次,探針的數(shù)量和位置可能受到細胞或組織中其他成分的影響。此外,這項技術的操作比較繁瑣,需要專門的技術和設備,而且需要大量的實驗和對照才能獲得可靠的結果。
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