植物原位雜交-武漢貝科新肽公司-原位雜交

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武漢貝科新肽科技有限公司

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原位雜交技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

原位雜交技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括陽性信號和陰性信號的判斷標(biāo)準(zhǔn)。陽性信號是指探針與目標(biāo)核酸序列特異性結(jié)合形成的雙鏈復(fù)合物，在顯色反應(yīng)、熒光染色或性同位素標(biāo)記下呈現(xiàn)出明顯的信號。陰性信號是指探針未與目標(biāo)核酸序列結(jié)合，不呈現(xiàn)任何信號。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析需要結(jié)合探針的特異性和敏感性、組織或細(xì)胞的原始結(jié)構(gòu)以及實(shí)驗(yàn)條件等因素綜合進(jìn)行。

和其它實(shí)驗(yàn)方法一樣，植物原位雜交，必須同時(shí)設(shè)對照試驗(yàn)以證明其實(shí)驗(yàn)結(jié)果特異性。對照試驗(yàn)的設(shè)置須根據(jù)核酸探針和靶核苷酸的種類和現(xiàn)有的可能條件去選定。ISHH的優(yōu)點(diǎn)是它的高度特異性，它可測定組織、培養(yǎng)的單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞提取物中的核苷酸含量。應(yīng)用高敏感度的性標(biāo)記cRNA探針在理想的ISHH的實(shí)驗(yàn)條件下檢測mRNA，其敏感度可達(dá)到20個(gè)mRNA拷貝/每個(gè)細(xì)胞。由于雙鏈DNA的穩(wěn)定性，原位雜交檢測，在用ISHH定位DNA時(shí)很少發(fā)生丟失，原位雜交，降解，其敏感性高到能夠顯示在染色體鋪片上，熒光原位雜交，有時(shí)甚至在組織切片上的單個(gè)基因拷貝。正因?yàn)槿绱耍瑢SHH結(jié)果的解釋應(yīng)持慎重態(tài)度，特別是前人未報(bào)告過的新發(fā)現(xiàn)。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）是在20世紀(jì)80年代末在性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非性分子細(xì)胞遺傳技術(shù)，以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導(dǎo)分子（reporter molecule）結(jié)合，雜交后再通過細(xì)胞化學(xué)過程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA（或RNA）探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記，然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上，再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針分子特異性結(jié)合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時(shí)顯示多種顏色等優(yōu)點(diǎn)，不但能顯示中期分裂相，還能顯示于間期核.同時(shí)在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).

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