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原位雜交-武漢貝科新肽-熒光原位雜交

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將32 P標(biāo)記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘,迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間,盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴(yán),以防液體蒸發(fā)。

雜交結(jié)束后,去除雜交液,熒光原位雜交,立即于室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振搖5分鐘,并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗 一次,同時(shí)應(yīng)避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時(shí)。此時(shí)已可進(jìn)行自顯影。如背景很高或?qū)嶒?yàn)要求嚴(yán)格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。

原位雜交技術(shù)(In situ hybridization,染色體原位雜交,ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù),原位雜交檢測,始于20世紀(jì)60年代。1969年美國耶魯大學(xué)的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖體基因探針與其卵母細(xì)胞雜交,將該基因進(jìn)行定位,與此同時(shí)Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相繼利用同位素標(biāo)記核酸探針進(jìn)行了細(xì)胞或組織的基因定位,原位雜交,從而創(chuàng)造了原位雜交技術(shù)。自此以后,由于分子生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展,特別是20世紀(jì)70年代末到80年代初,分子、質(zhì)粒和噬菌體DNA的構(gòu)建成功,為原位雜交技術(shù)的發(fā)展奠定了深厚的技術(shù)基礎(chǔ)。

而是對完整的斑馬魚胚胎進(jìn)行探針雜交及檢測,從整體上把握探針的結(jié)合部位,然后對胚胎進(jìn)行切片,以確定探針結(jié)合的具體位置。整胚原位雜交在斑馬魚分子生物學(xué)研究中是一種非常重要的實(shí)驗(yàn)方法,原位雜交的探針可以是同位素的探針,用自顯影來檢測;也可以是非同位素的探針,通過熒光或酶法予以檢測。我們這兒所介紹的一種原位雜交的方法是通過后者,以標(biāo)記探針,然后用酶聯(lián)的方法進(jìn)行檢測。

原位雜交-武漢貝科新肽-熒光原位雜交由武漢貝科新肽科技有限公司提供。武漢貝科新肽科技有限公司在化學(xué)試劑這一領(lǐng)域傾注了諸多的熱忱和熱情,貝科新肽一直以客戶為中心、為客戶創(chuàng)造價(jià)值的理念、以品質(zhì)、服務(wù)來贏得市場,衷心希望能與社會各界合作,共創(chuàng)成功,共創(chuàng)輝煌。相關(guān)業(yè)務(wù)歡迎垂詢,聯(lián)系人:夏先生。

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