植物原位雜交-原位雜交-武漢貝科新肽

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武漢貝科新肽科技有限公司

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公司官網(wǎng)：bkxtbio.com.cn
公司地址：湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號

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組織原位雜交(Tissue in situ hybridization），即原位雜交組織化學(xué)技術(shù)和原位雜交細胞化學(xué)技術(shù)

原位雜交技術(shù)的基本原理

利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現(xiàn)穩(wěn)定的雙鏈區(qū)，形成雜交的雙鏈。

1.兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，通過氫鍵結(jié)合，原位雜交，形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子

2.應(yīng)用帶有標記的（有性同位素，如3H、35S、32P，熒光素、生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針，原位雜交檢測，與組織切片或細胞內(nèi)待測核酸(RNA或DNA）片段進行雜交

3.用自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位

用原位雜交術(shù)，可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達。

此方法有很高的敏感性和特異性，可進一步從分子水來探討細胞的功能表達及其調(diào)節(jié)機制。已成為當今細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。

在ISHH，整個實驗周期是比較長的，植物原位雜交，實驗程序也比較繁雜，而雜交在ISHH整個實驗中可被認為是“短兵相接”的一步。雜交前的一切準備工作如增加組織通透性都是為了在雜交這一步驟中核酸探針能進入細胞或組織與其內(nèi)的靶核苷酸相結(jié)合。因此，雜交是ISHH中關(guān)鍵的而且是重要的一個環(huán)節(jié)。雜交是將雜交液滴于切片組織上，染色體原位雜交，加蓋硅化的蓋玻片，防止孵育過程中的高溫（50℃左右）導(dǎo)致雜交液的蒸發(fā)。為保證雜交所需的濕潤環(huán)境，可將其放在盛有少量5×SSC或2×SSC（standard saline citrate， SSC）溶液的硬塑料盒中進行孵育。雜交液的成分和預(yù)雜交液基本相同，所不同的是加入了標記的核酸探針和硫酸葡聚糖。

原位雜交技術(shù)的實驗結(jié)果

原位雜交技術(shù)的實驗結(jié)果包括陽性信號和陰性信號的判斷標準。陽性信號是指探針與目標核酸序列特異性結(jié)合形成的雙鏈復(fù)合物，在顯色反應(yīng)、熒光染色或性同位素標記下呈現(xiàn)出明顯的信號。陰性信號是指探針未與目標核酸序列結(jié)合，不呈現(xiàn)任何信號。實驗結(jié)果的分析需要結(jié)合探針的特異性和敏感性、組織或細胞的原始結(jié)構(gòu)以及實驗條件等因素綜合進行。

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