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主營(yíng)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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| 先生： |
生物領(lǐng)域應(yīng)用原位雜交技術(shù)的例子：
基因表達(dá)和調(diào)控研究：原位雜交技術(shù)可以用于研究基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。例如，可以標(biāo)記特定基因的探針，檢測(cè)該基因在不同環(huán)境、不同生長(zhǎng)條件下的表達(dá)情況，進(jìn)而研究其表達(dá)調(diào)控機(jī)制。
細(xì)胞分化與發(fā)育研究：在細(xì)胞分化與發(fā)育研究中，原位雜交技術(shù)常被用于檢測(cè)和定位特定基因的表達(dá)情況，進(jìn)而了解細(xì)胞分化的過程和機(jī)制。例如，可以標(biāo)記與細(xì)胞分化相關(guān)的基因探針，檢測(cè)該基因在不同組織、不同發(fā)育階段的表達(dá)情況。
一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。
2） 置換成30％的PBST溶液，放置5分鐘
3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復(fù)一次
4） 置換成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
蛋白酶處理與后固定（本實(shí)驗(yàn)不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，5體節(jié)到24小時(shí)的胚胎處理3分鐘，24小時(shí)以上的胚胎處理5分鐘或者更長(zhǎng)。發(fā)育時(shí)間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時(shí)間長(zhǎng)的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，以便于雜交。
2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。
3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。
4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，熒光原位雜交，室溫。
原位雜交技術(shù)還在以下生物領(lǐng)域有應(yīng)用：
細(xì)胞化學(xué)和學(xué)：原位雜交技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)特定化學(xué)物質(zhì)的定位和分布，例如檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)酶、、神經(jīng)遞質(zhì)等物質(zhì)的分布和定位。此外，還可以應(yīng)用于學(xué)研究，例如檢測(cè)細(xì)胞、分子的分布和定位等。
神經(jīng)科學(xué)：在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域，原位雜交技術(shù)常被用于研究神經(jīng)元的生長(zhǎng)、發(fā)育和連接等過程。例如，通過標(biāo)記特定基因的探針，可以檢測(cè)神經(jīng)元中特定基因的表達(dá)和定位，進(jìn)而研究其在神經(jīng)信號(hào)傳遞、神經(jīng)環(huán)路形成等方面的作用。
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第2年
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