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主營(yíng)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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原位雜交技術(shù)的技術(shù)流程
原位雜交技術(shù)的技術(shù)流程包括樣本處理、探針制備、雜交反應(yīng)和信號(hào)檢測(cè)等步驟。樣本處理包括組織或細(xì)胞的固定、包埋、切片和脫氧核糖核酸酶消化等步驟，熒光原位雜交，目的是保持組織或細(xì)胞的原始結(jié)構(gòu)和核酸序列的完整性。探針制備包括標(biāo)記探針、純化和變性等步驟，目的是提高探針的特異性和敏感性。雜交反應(yīng)包括預(yù)雜交、雜交和洗脫等步驟，目的是使探針與目標(biāo)核酸序列形成雙鏈復(fù)合物。信號(hào)檢測(cè)包括顯色反應(yīng)、熒光染色和性同位素標(biāo)記等步驟，目的是可視化目標(biāo)核酸序列的分布。
原位雜交第二天
1.
1）將探針回收，放于－20C保存(通常探針可重復(fù)使用十次左右)。
2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復(fù)一次。
3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。
4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復(fù)一次。
2.
1）用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動(dòng)。
2）室溫下加1ml 1：2：7溶液，時(shí)間為一小時(shí)。
3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連，4C 冰箱過(guò)夜。
組織原位雜交(Tissue in situ hybridization），即原位雜交組織化學(xué)技術(shù)和原位雜交細(xì)胞化學(xué)技術(shù)
原位雜交技術(shù)的基本原理
利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基順序，通過(guò)堿基對(duì)之間非共價(jià)鍵的形成，出現(xiàn)穩(wěn)定的雙鏈區(qū)，形成雜交的雙鏈。
1.兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，通過(guò)氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子
2.應(yīng)用帶有標(biāo)記的（有性同位素，如3H、35S、32P，熒光素、生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針，與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測(cè)核酸(RNA或DNA）片段進(jìn)行雜交
3.用自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位
用原位雜交術(shù)，可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。
此方法有很高的敏感性和特異性，可進(jìn)一步從分子水來(lái)探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。
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第2年
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