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主營：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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以菌落原位雜交為例：對分散在若干個瓊脂平板上的少數菌落（100-200）進行篩選時，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經培養(yǎng)一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應貯存于4℃直至得到篩選結果。
將少數菌落轉移到纖維素濾膜上
（1） 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。
（2） 用無菌牙簽將各個菌落先轉移至濾膜上，再轉移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應按一定的格子進行劃線接種（或打點）。每菌落應分別劃線于兩個平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質粒的菌落。
（3） 倒置平板，于37℃培養(yǎng)至劃線的細菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。
（4） 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個以上的不對稱位置作標記。在主平板大致相同的位置上也作上標記。
（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應的結果。
（6） 裂解細菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結合于纖維素濾膜。
原位雜交技術的原理是什么？有何用途
原位雜交技術的原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列，將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對，結合成專一的核酸雜交分子，經一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列要具備3個重要條件：組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結合的標記物(曾呈奎等2000)。
原位雜交技術還在以下生物領域有應用：
細胞化學和學：原位雜交技術可以用于研究細胞內特定化學物質的定位和分布，例如檢測細胞內酶、、神經遞質等物質的分布和定位。此外，染色體原位雜交，還可以應用于學研究，例如檢測細胞、分子的分布和定位等。
神經科學：在神經科學領域，原位雜交技術常被用于研究神經元的生長、發(fā)育和連接等過程。例如，通過標記特定基因的探針，可以檢測神經元中特定基因的表達和定位，進而研究其在神經信號傳遞、神經環(huán)路形成等方面的作用。
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第2年
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