武漢貝科新肽(圖)-原位雜交技術(shù)-原位雜交

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武漢貝科新肽科技有限公司

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熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）是在20世紀80年代末在性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非性分子細胞遺傳技術(shù)，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導分子（reporter molecule）結(jié)合，雜交后再通過細胞化學過程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA（或RNA）探針用特殊的核苷酸分子標記，然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上，再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針分子特異性結(jié)合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優(yōu)點，不但能顯示中期分裂相，還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).

預雜交

1）每個管中置換成大約300ulHYB－溶液，原位雜交，60℃水浴5分鐘，避免振蕩。

2）用等體積的HYB＋取代HYB－。

3）60℃水浴，原位雜交技術(shù)，預雜交4小時以上。

雜交

1）吸去預雜交的HYB＋，加上100ul已加入探針的HYB＋溶液（探針濃度約為1ng/ul）..

2）60℃ 溫浴過夜。

注：雜交與預雜交的溫度可以是55到60度不等，溫度越低，探針結(jié)合越好，溫度越高，背景越小。

同一樣本可以多次做原位雜交實驗嗎?

一般情況下，植物組織原位雜交，如果操作沒有得到理想的結(jié)果，是可以將探針洗滌然后進行再次的雜交的。如果使用的是直標型探針，還可以使用不同探針對同一樣本進行反復雜交。針對不同的樣本，處理方法略有不同。

原位雜交實操中哪些因素比較重要?

重要的因素：溫度、光照、濕度和試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA的雜交效率；光照影響著熒光染料的強度，所以探針要避光保存，其已經(jīng)雜交的片子可用防熒光淬火劑封片且避光保存；各種試劑pH也要達到要求，這也直接關(guān)系到原位雜交的穩(wěn)定性。

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