原位雜交雜交液
(一)雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外,還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛白蛋白及載體DNA或RNA等。
(二)雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加,可以減低探針與組織標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。
(三)賈酰胺可使雜交溫度降低,所以雜交液中加入適量的甲酰胺,可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標(biāo)本的脫落。
(四)硫酸葡聚糖能與水結(jié)合,從而減少雜交液的有效容積,提高探針有效濃度,以達(dá)到提高雜交率的目的。
熒光原位雜交(FISH)技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):
可多重染色:利用不同的熒光染料標(biāo)記不同的探針,植物染色體原位雜交,可以實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒庠浑s交,從而同時檢測多個序列,提高實(shí)驗(yàn)效率了。
高度創(chuàng)新性和性:FISH技術(shù)不僅可以用于研究已知基因或序列的染色體定位,還可以用于未基因或遺傳標(biāo)記及染色體畸變的研究,原位雜交公司,在基因定性、定量、整合、表達(dá)等方面的研究中頗具優(yōu)勢。
在原位雜交過程中,需要使用標(biāo)記的核酸探針,通常是在性核素或非性物質(zhì)中標(biāo)記的。這些探針可以通過不同的方式制備,原位雜交技術(shù),例如從已知序列的DNA或RNA制備,或者通過使用生物信息學(xué)方法設(shè)計(jì)和合成新的探針。
在進(jìn)行原位雜交時,原位雜交,細(xì)胞或組織需要固定在適當(dāng)?shù)闹С治锷希巛d玻片。然后,探針與細(xì)胞或組織中的DNA或RNA進(jìn)行雜交,通常是在加熱條件下進(jìn)行的。接下來,通過洗滌和顯影步驟去除未結(jié)合的探針和信號增強(qiáng)劑,后用顯微鏡觀察雜交信號的位置。
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