外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),外泌體質(zhì)譜服務(wù), 1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中 。
所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,外泌體質(zhì)譜技術(shù)服務(wù),且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳1汁中。 有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精1確分子機(jī)制剛剛開始研究。 外泌體被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。
外泌體上的TNF家族蛋白不能被膜型金屬蛋白酶切割,故較為穩(wěn)定,同時(shí)借助膜形成三聚體,具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性。而且,人們認(rèn)為外泌體的轉(zhuǎn)運(yùn)TNF家族蛋白,與各種炎1癥疾病和自身免1疫疾病的產(chǎn)生相關(guān)。
例如,從類風(fēng)1濕關(guān)1節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞中釋放出來的外泌體上,聚集高濃度的膜結(jié)合型TNF-α,會(huì)加重類風(fēng)1濕關(guān)1節(jié)炎病情。
外泌體研究開展的如火如荼。不論是 SCI 文章的發(fā)表還是各類基1金的申請(qǐng),外泌體質(zhì)譜檢測(cè)服務(wù),外泌體相關(guān)研究表現(xiàn)都非常亮眼。外泌體提取后,研究人員面臨的一個(gè)重要問題就是,我提取的是不是外泌體?如果是的話,質(zhì)量如何?
現(xiàn)階段,外泌體質(zhì)譜,對(duì)外泌體進(jìn)行鑒定主要有三種主流的方法:電鏡、粒徑和 Western blot 分析靶標(biāo)物。之前我們已經(jīng)對(duì)外泌體電鏡進(jìn)行了總結(jié),今天我們來看看外泌體的粒徑分析。
外泌體粒徑分析原理
外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析(Nanoparticle tracking Analysis, NT A),其原理是對(duì)每個(gè)顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)進(jìn)行追1蹤和分析,結(jié)合 Stockes-Einstein 方程式計(jì)算出納米顆粒的流體力學(xué)直徑和濃度。NT A技術(shù)已被外泌體研究領(lǐng)域認(rèn)可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式,NT A技術(shù)的樣本處理更簡(jiǎn)單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度更快。
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